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ecl冷光 在 Re: [問題] 請問western"照相"的兩個方式- biotech 的推薦與評價
2 F →blence:ECL冷光偵測是富士的機器,我同樣比較LAS-3000型的與一般 09/01 01:34. 3 F →blence:X光片的效果上,用最低階sensitivity的冷光儀就足以勝過壓片 09/01 01:35. ... <看更多>
ecl冷光 在 [求救] western ECL反應條件- 看板Biotech - 批踢踢實業坊 的推薦與評價
有關western最後一步以冷光呈色劑ECL反應,我們家得做法是:
洗好2抗的膜會放在已剪開得自黏式塑膠膜上,
然後以p1000 pipetman吸取3ml得ECL試劑來回均勻淋在膜上,
最後把塑膠膜蓋上,反應2~5分鐘後,將ECL試劑擦拭乾淨,
再使用冷光照相系統(UVP)偵測。
~問題來了~
老師每次看到結果圖都會嫌棄我們是不是ECL沒有淋均勻= =
操作給老師看之後,老師說我淋太快了這樣不行。
因此第二次照着老師建議得速度做了一次,覺得還是很難控制> <
結果還是會有某一區塊比較暗的情形,好像那一塊淋到得ECL比較少的樣子
我們家使用得ECL試劑是millipore的2合1那種。
我想請問大家ECL也是用淋得嗎?有什麼訣竅可以做好這一步?
不然辛苦鑄膠跑膠轉印完hybrid完抗體,
結果敗在最後一步實在很扼腕也很打擊信心呀T T
另外就是我有看過別的實驗室做法,
是像搖抗體那樣,把膜放在ECL裡面搖(反應)。
我想問問版上是否有人也是這樣子做得呢?想要參考看看這樣做該如何抓條件!
謝謝各位耐心看完我打得東西。
雖然WESTERN實驗變異很多,但因為這一步一直被老師complain,
我又超無解得,實在很苦惱。
有搜尋過版上western相關文章,但發現大家討論照不出東西比較多,
還有跑膠轉印條件之類得.....
最後希望大家實驗都能夠順利啦!謝謝各位^^
做個分格線
圖片檔案網址在這邊,如果看不到請再和我說,謝謝各位(感恩)
https://ppt.cc/BT4h
◆ From: 219.84.253.154
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