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DNA凝膠電泳分析(DNA agarose gel electrophoresis). DNA含有許多磷酸根,在中性及鹼性環境下帶負電,通電後會往正極移動。洋菜膠內帶有許多孔隙, 濃度 愈高,孔隙愈 ... ... <看更多>
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Agarose Gel電泳
試劑耗材:
A.材料: 1. 將0.7-1%藻膠糖溶於溶液TBE或TAE中 2.1X TBE或TAE緩衝液(與上需相同) 3.
gel loading dye 4.10 mg/ml ethidium bromide
緩衝溶液:
a.50x TAE:
242 g Tris base
57.1 g glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA
b.10x TBE
108 g Tris base
55 g boric acid
40 ml 0.5 M EDTA, pH=8
distilled water to 1 liter
6x gel loading buffer
0.25% Bromophenol blue
0.25%Xylene cyanol FF
15% Ficoll Type 4000
120 mM EDTA
實驗步驟:
1. 先配置100 ml 0.7%藻膠糖溶液,於玻璃量杯或錐形瓶中量稱 0.7g藻膠糖和100 ml 1X
TBE或TAE緩衝液。 2.利用微波或於加熱板(hot plate)上用攪拌子加熱,直到溶液變成透
明為止。 3.冷卻至55oC(Ethidium bromide可在此時加入,濃度為0.5 μg/ml)。 4.準備製
膠的容器或盤子,現在都已有商品化現成的套件可用。 5.選擇適當的牙齒(tooth)並將其固
定於製膠盤中(牙齒的作用為在膠上產生適當大小的孔洞,用來loading樣本的)。 6.約倒入5
0ml 藻膠糖溶液置盤子中,牙齒插入的深度為5 mm。置於在室溫中約20分鐘等膠凝固。 7.
拔掉牙齒,準備開始跑電泳,小心地將已凝固的膠移至電泳槽,倒入電泳用緩衝液(與製膠
用的需相同),並使牙齒製造出的孔洞均充滿電泳液。 8.多餘的藻膠可以儲存於室溫或是
重新力庸微波爐溶掉。 9.樣本的配置以每 5 μl DNA加入1 μl 的 6x gel loading dye,
均勻混和後,每個孔洞加入5-12 μ DNA。 10.電泳電壓約從50-150伏特間,跑膠的時間依DN
A的片段大小為準。 11.假如在配膠時沒有加入 ethidium bromidestain,此時可利用 0.5
μg/ml ethidium bromide染。之後可以在短波UV光下顯現出螢光,如果DNA是要用來clon
ed可用手持式長波UV光來觀察
這些阿 請實驗完後 板主d一下 要不然有著作權問題= =~
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時間過的很快 一點一滴在消逝
隨著時間過去,越漸模糊無法確認的味道
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.68.233.181
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